牙鲆魚苗病害防治實驗的探討 |
| 出處：《科學養魚》 作者：于廣寶 水產養殖網 2009-10-06 20:13:00 |
山東省水產養殖病害防治中心
隨著牙鲆魚養殖業的發展，各類病害肆虐，其中以暴發性流行細菌病的危害最為嚴重。本試驗主要研究由致病性弧菌、嗜水氣單胞菌、愛德華氏菌引起的紅頭、紅體、體表鰭條潰爛、腹水等疾病的防治，從而提高苗種培育與商品魚養殖的成活率，提升經濟效益。
一、實驗器材
1 ． 診斷選藥盒?，F在市面上有銷售成品的方便型診斷選藥盒，每次可進行16種抗菌藥物的篩選實驗，分別是：四環素、氧氟沙星、復方新諾明、青霉素、硫酸粘桿菌素、羅紅霉素、慶大霉素、新霉素、強力霉素、恩諾沙星、鏈霉素、氟苯尼考、諾氟沙星、阿米卡星、頭孢拉定、阿莫西林。其他參考試驗藥片分別是：土霉素、頭孢氨芐、阿奇霉素、卡那霉素、頭孢噻呋鈉、TMP、鹽酸克林霉素、甲硝唑、替米考星、泰樂菌素、磺胺問甲氧嘧啶、大觀霉素、紅霉素、鹽酸沙拉沙星、舒巴坦鈉、鹽酸二氟沙星。
2 ． 自制培養基。培養皿、試管、消毒生理鹽水、蛋白胨、瓊脂、高壓鍋等。每個可做4～8個種類的藥物選別。
3 ． 生物殺菌劑。市售針對弧菌、單胞菌等的嗜細菌類生物制劑。
4 ． EM菌、硝化寶等微生物制劑，分解水體中有機物、氨氮、亞硝酸氮等。
5 ． 剪刀、解剖刀、鑷子、托盤等。
6 ． 無菌操作臺、酒精燈、培養箱、顯微鏡等。
二、實驗方法
實驗有兩個要點，一是用傳統的抗菌素治療，通過使用診斷選藥盒選取對致病菌作用最有效的抗菌素，進行藥浴及投喂藥餌防治；二是通過生物殺菌劑進行針對性治療實驗和生物殺菌劑加EM菌、其他微生物改良制劑的預防感染實驗。
實驗從三個方面進行：一是疾病治療，利用診斷選藥盒選取最佳抗菌藥和用生物殺菌劑進行疾病治療實驗；二是利用特定病原菌進行疾病感染和治療的實驗；三是根據治療實驗的效果，進行針對性的疾病預防實驗。
1 ． 疾病治療實驗
(1) 當魚類出現活動異常、攝食不良、死亡增加及表現出一定的病征，采集病魚的病灶部位進行細菌培養， 用診斷選藥盒進行選藥實驗，選取對致病菌作用力最強的抗菌藥用于疾病治療。
(2) 治療實驗分兩組，每組分別使用2～500升的小水池，各放入發病的魚苗200尾，抗菌藥分別用10毫克／升藥浴4小時，按每千克魚體重100毫克投喂藥餌連續5天；5毫克／升藥浴4小時，按每千克魚體重50毫克投喂藥餌連續5天。進行效果對比。
2 ． 感染實驗
(1) 采集大量發病水池內病魚病灶部位進行細菌分離培養鑒定，獲取致病性弧菌、嗜水氣單胞菌、愛德華氏菌。
(2) 分別對分離獲取的三種細菌進行診斷選藥盒選藥實驗，選擇對病原菌作用最強的抗菌藥用于實驗。同時大量培養三種細菌，達到用于攻擊感染實驗的用量，以便進行健康魚苗的攻擊感染實驗。
(3) 實驗組合設定。致病菌的組合：三個單一菌種攻擊感染實驗(弧菌、嗜水氣單胞菌、愛德華氏菌)，混合菌種攻擊感染實驗(弧菌+嗜水氣單胞菌、弧菌+愛德華氏菌、嗜水氣單胞菌+愛德華氏菌)共6種攻擊感染實驗組，分別編號為實驗組1～6，同時設定一個無細菌攻擊感染的對照組。以500升實驗水池為例，每組8個500升實驗小水池，入池魚苗各200尾。根據需要，選擇相應感染實驗類型。
(4) 感染實驗的實施
A． 選取全長5厘米左右的健康魚苗，魚苗攝食狀態良好，每日死亡在0.1％以下。
B． 在相應的水池各放紫外線殺菌海水300升，分別移入200尾魚苗。
C． 對照組2個水池，不添加任何細菌。每個感染實驗組6個水池，2 個不作任何處理； 2 個采用診斷選藥盒選取的抗菌藥10毫克／升藥浴4小時后換水，每天1 次，同時按每千克魚體重100毫克口服，連續3～5天1個療程；2個采用生物殺菌劑2 毫升／米3，藥浴4 小時后換水，連續5 天。
D． 實施感染的實驗水池分別按照致病菌1×105細胞數／毫升進行接種，24小時內不換水，24小時后開始轉入正常培養；或者在投喂的配合飼料中噴灑接入適量相應的致病菌，當開始發現有魚苗異常時實施相應治療措施等。
(5)實驗時間及注意事項。實驗期間15天，每天吸污并記錄相應水池內死魚數量、活力和攝食情況。所有實驗水池工具專池專用，嚴格控制交叉感染，日常操作中對照組優先進行。第15天，實驗結束，統計在池魚苗數量、活力和攝食等情況，進行數據分析。
3．預防感染實驗
(1)根據診斷選藥盒選取的效果最強的抗菌藥和生物殺菌劑及EM菌進行病菌疾病預防實驗。
(2)一般采用200～1000升的小水池進行預防實驗，設定對照組、生物組、抗菌藥組，每組各2個平行實驗水池。
對照組：正常管理，不加任何藥物、生物制劑；生物組：生物殺菌劑2毫升／米3+EM菌2毫升／米3，每3天一次預防接種，定期投喂藥餌，每千克飼料加入生物殺菌劑1毫升+EM菌1毫升，與水中投放同時進行；抗菌藥組：根據診斷選藥盒選取的作用力強的抗菌藥設定1～3個實驗組，采用定期添加2毫克／升的相應抗菌藥進行預防感染，每3天預防一次，同時投喂藥餌，按照魚苗體重每千克添加抗菌藥20毫克，與水中投放同時進行。
(3)實驗期間及注意事項。實驗期共40天，選取平均全長5厘米的魚苗開始進行預防實驗，期間按照魚苗體重的3％～4％投喂全價配合飼料，每天流水300％～500％，每天兩次吸除池底污物，發現死魚及時撈除，記錄每天魚苗死亡數量、攝食情況，每周一次測量魚苗全長、體重，調整投餌量。第40天實驗結束，統計每個水池在池魚苗數量、全長、體重等生長情況。根據實驗數據分析預防效果，確定最佳預防方法。
三、實驗實施中防止病原菌擴散的措施
1．用于細菌培養實驗的器材使用前后經過高溫高壓消毒，廢棄物也要經過高溫高壓消毒滅菌后再丟棄。
2．實驗水池等由專人負責管理，日常進出車間要進行嚴格消毒，更換專用水鞋、外套進入車間，實驗水池有相應的專用工具。
3．由于實驗期間培養大量的病原菌，為了防止病原菌污染周圍環境，實驗在獨立的車間內進行，排出的廢水經統一回收，用50毫克／升漂白精消毒24小時后，再用硫代硫酸鈉50毫克／升中和后排放。實驗全部結束后對整個車間用含200毫克／升有效氯的漂白精溶液全面噴灑消毒，殺滅病原菌。
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